泛亚电竞的林可霉素检测试剂盒使用说明书（酶联免疫法）提供了一种精准的检测方法，用于测定尿液、组织和蜂蜜样本中的林可霉素（Lincomycin，Lin）。本试剂盒采用间接竞争ELISA技术，由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂构成。

1. 原理及用途

在检测过程中，标准品或样本溶液中林可霉素与酶标板上的偶联抗原竞争结合抗林可霉素抗体。随后添加酶标记物，通过TMB底物产生显色反应。样本的吸光度值与林可霉素含量呈负相关，通过与标准曲线比较可得出林可霉素的残留量。

2. 技术指标

本试剂盒拥有以下技术指标：

• 灵敏度：005 ppb (ng/ml)
• 反应模式：25℃，30分钟至15分钟
• 检测下限：
  • 尿液、蜂蜜：15 ppb
  • 组织：3 ppb
• 交叉反应率：林可霉素 100%
• 样本回收率：
  • 尿样：90% ± 10%
  • 组织：80% ± 10%
  • 蜂蜜：80% ± 15%

3. 试剂盒组成

试剂盒包含：

• 酶标板：96孔
• 标准液：各1ml（0 ppb、005 ppb、015 ppb、045 ppb、135 ppb、405 ppb 高标准液：100 ppb 1ml）
• 酶标记物（红盖）：55ml
• 抗体工作液（蓝盖）：55ml
• 底物液A（白盖）：6ml
• 底物液B（黑盖）：6ml
• 终止液（黄盖）：6ml
• 20×浓缩洗涤液（白盖）：40ml
• 2×复溶液（黄盖）：50ml
• 说明书：1份
• 盖板膜：1张
• 自封袋：1个

4. 所需器材和试剂

使用本试剂盒需准备的器材包括：酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管及天平（感量0.001g），微量移液器（单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl）以及试剂（甲醇，盐酸）。

5. 样本前处理

在进行样本处理之前，需确保实验器具清洁并使用一次性吸头，以防止交叉污染。

5.1 样本处理步骤

尿样处理方法：

取100µl清亮尿样（浑浊尿样需过滤或室温4000转/分离心5分钟），加入900µl复溶液混匀，取50µl进行分析。样本稀释倍数：10，检测下限：15 ppb。

组织样本处理方法：

称取均质后的组织样本1g±0.05g，加入5ml提取液，充分振荡3分钟，室温4000转/分离心10分钟。取上清液0.2ml加0.6ml复溶液混匀，取50µl进行分析。样本稀释倍数：20，检测下限：3 ppb。

蜂蜜样本处理方法：

称取均质后的蜂蜜样本1g±0.05g，加入5ml去离子水，振荡2分钟，室温4000转/分离心5分钟。取上清液1ml加1ml复溶液混匀，取50µl进行分析。样本稀释倍数：10，检测下限：15 ppb。

6. 酶联免疫试验步骤

请将所需试剂从4℃环境中取出，放置于室温平衡超过30分钟。采用洗涤液时，务必确保其在室温下充分溶解。按以下步骤进行实验：

1. 编号：在微孔板上按顺序标记样本和标准品，每个样本和标准品进行2孔平行，并记录位置。
2. 加样：将标准品或样本50µl/孔加入每个微孔中，然后加入酶标记物和抗体工作液各50µl，轻轻混匀并用盖板膜封住，25℃反应30分钟。
3. 洗涤：揭盖板膜，小心甩去孔内液体，加入350µl工作洗涤液，静置30秒后弃去，重复洗涤5次，最后一次拍干。
4. 显色：每孔加入底物液A和底物液B各50µl，轻轻混匀，在25℃避光条件下显色15分钟。
5. 终止反应：加入终止液50µl，轻轻混匀以终止反应。
6. 测定吸光值：用酶标仪在450nm处测定每孔的吸光度值，建议使用双波长（450/630nm）进行测量。

7. 结果分析

计算标准液或样本的百分吸光率，利用标准曲线绘制并计算样本的浓度。如果使用泛亚电竞的专业分析软件，可实现更快速准确的大量样本分析。

8. 注意事项

• 确保室温不低于25℃，试剂和样本需回到室温。
• 在洗板过程中避免出现孔内干燥现象。
• 混合和洗板时需确保均匀彻底。
• 所有孵育过程中应使用盖板膜封住微孔板，避光处理。
• 不可使用过期试剂盒及不同批次试剂间互换使用。
• 如显色液变色，应立即弃用。

9. 贮藏及保存期

试剂盒应在2-8℃条件下保存，避免冷冻，保质期为1年，具体日期见包装盒。