在上期文章中，我们探讨了细胞转染的应用和基本分类。本期将继续为大家介绍细胞转染中的一种重要方法——病毒转染。病毒转染是一种高效的细胞转染技术，通过病毒载体将外源基因包装在病毒外壳中，利用其天然的感染性将外源基因导入宿主细胞，促使其在细胞中稳定表达。根据不同的病毒载体，病毒转染可分为腺病毒、慢病毒、逆转录病毒和腺相关病毒。其中，慢病毒因其广泛的应用和良好的转染效率而备受青睐，接下来，我们将重点介绍慢病毒的相关内容。
一、慢病毒结构
慢病毒源自HIV-1，是一种有包膜的RNA病毒，直径为80-120nm，呈二十面体对称球形。其病毒颗粒外层是包膜，内部依次为基质蛋白和衣壳，最里层则是两条同源的正链RNA及逆转录酶、整合酶和蛋白酶等酶。以HIV-1为例，慢病毒基因组复杂，包含9个基因。两端各有反向末端重复序列(LTR)，中间包括gag、pol、env三种编码结构基因，以及tat、rev调节基因和vif、vpr、vpu、nef四个辅助基因。
在对慢病毒基因组进行研究与编辑的过程中，衍生出了第一代、第二代和第三代慢病毒系统。目前，第二代三质粒系统和第三代四质粒系统在实验室得到了广泛应用。第二代三质粒系统包括一个包装质粒（编码Gag、Pol、Rev和Tat基因）、一个包膜质粒（表达Env或VSV-G糖蛋白以提供受体结合蛋白）、以及一个含外源目的基因的穿梭质粒。
二、慢病毒的复制与包装
为了提高靶细胞的转染效率，首先需要获得高滴度的慢病毒，这就需要进行慢病毒的复制和包装。一般通过将三种质粒按一定比例共同转染至293T细胞中，经过48-72小时培养后，收集含病毒的上清液或进一步浓缩病毒。
三、慢病毒感染细胞过程
慢病毒感染细胞的第一步是通过其包膜蛋白与宿主细胞结合，随后融合至宿主细胞膜，释放内部的结构蛋白和酶。在逆转录酶的作用下，慢病毒RNA被逆转录并与整合酶形成复合物，随后进入宿主细胞核并整合入宿主基因组，最终实现外源基因的表达。
四、常见的慢病毒转染类型
1. **慢病毒荧光转染**：将标记的荧光基团（如GFP、mCherry等）转染入细胞，筛选后获得带有荧光蛋白的目标细胞，通过荧光显微镜或流式细胞仪检测转染效率。
2. **慢病毒Luciferase化学发光转染**：转染携带荧光素酶编码基因的质粒，细胞内产生的荧光素酶可催化生成绿色或黄色荧光。在高灵敏度的生物发光成像技术下，检测光强度变化，尤其适合监测活体动物中的肿瘤进展。
3. **慢病毒细胞永生化转染**：利用慢病毒转染技术，将外源永生化基因导入原代细胞，打破其分裂次数限制，使其获得无限增殖能力，从而获得稳定的永生化细胞株。
泛亚电竞公司提供多种细胞系和原代细胞的慢病毒转染服务，包括绿色荧光蛋白（GFP）、红色荧光蛋白（mCherry、RFP）、化学发光（LUC）以及SV40永生化转染，总共约40种稳转细胞系，亦可根据客户需求进行定制转染。
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