泛亚电竞的人骨肉瘤细胞MG63培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P

传代方法：第一次建议1:2传代

传代情况：每2天换液

备注：使用无菌离心管收集瓶中培养基，留作对比。若对比效果不理想，建议直接购买泛亚电竞的完全培养基。

二、细胞处理方法

收到细胞后，将其培养至健康状态，然后灌满完全培养液并封好瓶口，这样是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，用75%酒精喷洒细胞瓶进行消毒，随后将其放入超净台进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后进行处理。用显微镜观察细胞生长情况，并拍照留存（最好每种倍数拍一张：40x, 100x, 200x）。前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片的情况下视为收到状态良好。

传代后建议一个瓶子使用原瓶的完全培养基，另一个瓶子使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后务必将瓶盖松动。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，将瓶中完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基在37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，则进行传代，步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至细胞瓶，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，用5ml余下的完全培养基迅速终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基进行重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩并变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使之脱落。将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞后加入1ml泛亚电竞无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后加入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐存储，需在-80℃冰箱中放置24小时以上后再转入液氮罐中。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶，外壁用75%酒精擦拭。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟。
3. 弃上清，沉淀细胞重悬于5ml完全培养基，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞贴壁不牢，在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。如果脱落的细胞较多，将培养液收集至离心管中，以1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应，离心后弃上清，补充1-2ml完全培养基重悬。按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1) 细胞出现问题可重发的情况及判定标准

1. 在运输中遇到细胞丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等问题，可重发；
2. 细胞污染如在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，若大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发；
4. 干冰冻存发货细胞复苏24小时后或常温发货细胞静置4小时以上且未开封出现污染，可重发；
5. 细胞活性问题需在收到产品7天内提供真实实验结果，使用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发；
6. 收到细胞当天及第2、3天拍照，未告知的视为产品合格。
7. 如在4-7天内出现问题，有照片及操作记录，且经技术人员核实责任由我方承担，则可重发。若技术评判为双方责任，共同协商处理或按合同价的50%收费重发。

2) 细胞出现问题不予重发的情况

1. 客户造成的细胞污染，不重发；
2. 客户不正确操作导致细胞状态不佳，不重发；
3. 使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳，不重发；
4. 细胞状态不良而未提供培养前3天的照片，不重发；
5. 细胞在培养过程中经其他处理后，不重发；
6. 收到细胞2天内未告知问题，不重发；
7. 视具体情况而定。

如需了解更多信息或购买，欢迎访问泛亚电竞官方网站！