泛亚电竞提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书包括细胞培养条件、处理方法、培养步骤及注意事项，适用于生物医疗研究与应用。

细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：该细胞具贴壁和悬浮混合生长特性。

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）。

培养体系：F12K培养基加20%胎牛血清（FBS）及1%抗生素-青霉素/链霉素（P/S）。

传代方法：首次建议以1:2的比例进行传代。每2天需更换培养液。悬浮细胞需离心收集，而贴壁细胞则按照贴壁处理方法操作，并用无菌离心管收集培养基以便过渡培养。

细胞收到后处理

在收到细胞后，需将其培养至良好生长状态。然后灌满完全培养液，并确保瓶口密封，以便顺利运输。收到细胞后，请使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后放入超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放在37°C、5% CO2的培养箱内静置3-4小时，以稳定细胞状态。通过显微镜观察细胞生长情况，并对其拍照保存，建议至少各拍摄40x, 100x, 200x倍数的照片。前三天的照片为重要的售后依据，未提供照片的情况下默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞的密度未超过80%，可将完全培养液收集至离心管中，留5ml培养基于37°C、5% CO2孵箱培养；若超过80%则进行传代：

1. 对于贴壁细胞：
   1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗1-2次。
   2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，观察细胞脱落情况。一旦细胞变圆并开始脱落，及时加入超过5ml的完全培养基终止消化。
   3. 用移液管轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，并转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液并补加1-2ml完全培养基重悬。
   4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶，补充新培养基至5-8ml/瓶，然后放入37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养。
2. 对于悬浮细胞：
   1. 方法一：收集细胞，1000 RPM离心8-10分钟，弃去上清后添加1-2ml培养液并混匀，将细胞悬液以1:2的比例分配入新瓶中。
   2. 方法二：可选择换液方式，弃去一半培养基，剩余细胞悬浮后按1:2比例分配至新瓶中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液1ml，观察细胞状态，待细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀的细胞需加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001）混匀，最后转入冻存管中。
4. 直接将冻存细胞放入-80°C冰箱中，若需转入液氮罐，需在-80°C保存超过24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置于37°C水浴中解冻，待管内无结晶后使用75%酒精擦拭外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后用5ml完全培养基重悬，然后接种至T25培养瓶，放于37°C、5% CO2培养箱中继续培养，第二天更换新鲜完全培养基。

注意事项

在运输过程中，由于部分细胞贴壁不牢，可能造成细胞脱落，属正常现象。若脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打，待消化1-2分钟后加5ml完全培养基终止消化，重复离心并重悬后按1:2比例传代。

售后条款

对于细胞出现问题的重发情况，包括运输途中的问题（如细胞丢失、培养液严重漏液等）、收到后的污染问题等，需在指定时间内提出真实实验结果以便核实。若是由于客户操作不当、非推荐培养体系、未提供前3天培养照片等原因，引起的细胞状态不佳，将不予重发。

如需了解更多有关大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的实验及培养知识，请关注泛亚电竞，我们致力于为您提供可靠的细胞培养解决方案。