慢病毒感染细胞：为什么你的感染效率如此低下？慢病毒不仅可以感染分裂或非分裂的细胞，还能将外源基因有效整合到宿主染色体中，实现持久表达，同时不易引发机体免疫反应，因而被誉为“细胞实验的最佳选择和体内实验的必备工具”。作为基因治疗的载体，慢病毒在针对各类遗传性和后天性人类疾病的治疗中备受青睐。从基础研究到临床应用，高纯度和高滴度的慢病毒都是理想的基因操作工具。

由于实验中使用的细胞类型不同，慢病毒感染的效率也会有所差异。要提高慢病毒的感染效率，合适的实验步骤和最佳实验条件是成功的关键！以“24孔培养板、贴壁细胞”为例，慢病毒感染细胞的常规操作步骤如下：

实验步骤

Day 0：接种细胞 - 每孔按5×10^5个待感染细胞铺板，使用含有10% FBS的DMEM培养基进行培养。

Day 1：细胞感染 - 在感染前，根据说明书用完全培养基配置感染液，并吸掉旧培养基，更换为感染液。参考细胞的MOI值，计算所需的病毒使用量，并加入病毒进行感染，充分混匀。

Day 2：病毒感染8-16小时后，换回常规培养基，继续培养。

Day 3-4：确认感染效果 - 在感染72小时后，显微镜下观察感染效果，特别是EGFP或Cherry的表达情况。

如果你认为所有细胞操作都如此简单，可能会面临意想不到的挑战。在慢病毒感染细胞的过程中，确立合适的MOI值是至关重要的。什么是MOI呢？它是复感染指数，代表病毒对细胞的感染能力，MOI越高，细胞感染的难度就越大。通常将某种细胞达到80%感染率所需的病毒颗粒数与细胞数的比值作为该细胞的MOI。

MOI计算

MOI的计算公式为：MOI = （病毒滴度 × 病毒体积）/ 细胞数目。

感染条件及MOI选择原则

1. 在细胞形态不受影响的情况下，尽可能使用少量病毒感染细胞。

2. 选择感染效率约为80%的条件作为最佳感染条件。

通过细胞感染预实验，可以确定慢病毒对细胞的最佳感染条件，明确细胞的MOI，以便进行正式实验。这些步骤和原则如果结合泛亚电竞的产品与技术，将极大提升慢病毒感染的整体效果，推进生物医学研究的进展。